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为了研究如何提高油菜种子的含油量 研究者将转运肽基因与酶D基因相连 导入油菜细胞并获得了转基因油菜.请据图回答:(1)研究人采用PCR技术获取酶D基因和转运肽基因 该技术是利

为了研究如何提高油菜种子的含油量,研究者将转运肽基因与酶D基因相连,导入油菜细胞并获得了转基因油菜.请据图回答:

(1)研究人采用PCR技术获取酶D基因和转运肽基因,该技术是利用___的原理,使相应基因呈指数增加.此技术中最重要的酶是___.三种限制酶(Xbal、Clal、SacI)的切点如图所示,则用___和___酶处理两个基因后,可得到两基因相连的融合基因.
(2)将上述融合基因插入如图所示Ti质粒的___中构建基因表达载体,说明此结构的两端有___和___酶的切割序列.然后把重组质粒导入农杆菌中,为了获得含融合基因的单菌落,应进行的操作是___,然后再利用液体培养基将该单菌落振荡培养,可以得到用于转化的侵染液.
(3)剪取油菜的叶片放入侵染液中一段时间,此过程的目的是___,进一步筛选后获得转基因油菜细胞,依据___的原理,可将其培育成转基因油菜植株.
(4)用___法可检测转基因油菜植株中的融合基因是否成功表达.
分类:生物 2018-02-01 共 2 个回复
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(1)PCR技术利用的原理是DNA双链复制,从拟南芥基因文库中获取转运肽基因.此技术中最重要的酶是耐高温的DNA聚合酶.用ClaⅠ限制酶和DNA连接酶处理两个基因后,可以得到A、D端相连的融合基因.
(2)将上述融合基因插入图中Ti质粒的T-DNA中,能够构建表达载体即重组质粒,说明此结构的两端有XbaⅠ和SacⅠ酶的切割序列.将获得的农杆菌接种在含四环素的固体平板上培养得到单菌落,再利用液体培养基震荡培养,可以得到用于转化的浸染液.
(3)剪取油菜的叶片放入侵染液中一段时间,此过程的目的是利用农杆菌将融合基因导入油菜细胞,进一步筛选后获得转基因油菜细胞.依据细胞具有全能性的原理,通过植物组织培养技术,可培育成转基因油菜植株.
(4)用抗原-抗体杂交法可检测转基因油菜植株中的融合基因是否成功表达.
故答案为:
(1)DNA复制   耐高温的DNA聚合酶   ClaⅠDNA连接
(2)T-DNA XbaⅠSacⅠ将获得的农杆菌接种在含四环素的固体培养基上培养
(3)利用农杆菌将融合基因导入油菜细胞 细胞具有全能性
(4)抗原-抗体杂交


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